Polysome profiling

产品介绍

服务介绍

Polysome profiling 实验，是利用核糖体沉降系数较大的特性，用蔗糖密度梯度离心的方法分离多聚核糖体。由于核糖体是细胞里密度最高的生物大分子，一条 mRNA 上结合的核糖体越多，在蔗糖密度梯度离心时的沉降速率越快，因此结合不同数量核糖体的mRNA 通过离心在溶液中会被分开。离心结束后将蔗糖溶液由底部缓慢抽出，即可对结合有不同数量核糖体的组分进行分离，可以直观地反映细胞内翻译的状态。

实验流程方法

Polysome profiling 是一种翻译组学的研究方法，其操作流程为先用放线菌酮或氯霉素处理样本，然后裂解细胞，离心并取上清液，之后将上清液转移至蔗糖梯度上进行超离。最后，进行核糖体检测及分离。研究人员可根据实验需要，继续做 PCR 定量分析、蛋白质提取等实验。



Polysome profiling实验流程概要（source：Su D, et al., 2024）

技术应用

① 准确检测蛋白翻译效率；

② 分析目标RNA降解、翻译起始和抑制等机制，研究翻译调控与基因表达；

③ 挖掘潜在翻译的非常规RNA，如lncRNA、circRNA的翻译。

技术优势

① 直观反映翻译状态：Polysome profiling技术能够直观地反映细胞和组织内的翻译状态，通过分析不同组分中mRNA的分布，可以了解特定mRNA的翻译活跃程度；

② 有助于理解翻译动态变化：Polysome profiling能够检测翻译中发生巨大变化的RNA，结合测序技术，有助于理解在不同生理或病理状态下翻译动态的变化。

升级版Polysome profiling plus服务内容

①增加组分：基础版Polysome profiling可根据沉降系数大小，把核糖体-RNA复合物分离成5个组分，而升级版Polysome profiling提供共18个分离的组分，可增加RT-qPCR数据点，绘制更详细的翻译动态折线图，更精准反映翻译活性的动态变化；

②增加RNA质控：检测RNA完整性，确保下游的分析。如送样不均衡，可根据质检结果进行相对等量上机(但不一定准，因为复合物含核酸和核糖体、蛋白等)

③能处理的样本类型增多：包括细胞、组织、细菌、真菌菌体等。

④统计AUC值：P/non-P ratio常用于表征样品整体的翻译活性。

七辰翻译组技术服务内容



Polysome Profiling图谱示例

特点	Polysome profiling/Polysome-seq	Ribo-seq	RNC-seq	RDisome-seq
mRNA长度	全长	核糖体保护片段区域	全长	双核糖体保护片段区域
翻译中RNA回收难度	难	难	易	难
起始量	多	多	少	多
测序方法	Microarray/NGS	NGS	Microarray/NGS	NGS
测序长度	任意	22-35 nt	任意	约54-68 nt
检测序列变异	√	×	√	×
UTR	√	×	√	×
检测核糖体位置、密度、ORF、uORF	×	√	×	√
每条mRNA上核糖体数目	√	×	√	×
技术难点	离心，梯度液分离，RNA 回收	酶切条件	RNC-mRNA 易断裂	酶切条件
生理条件	√	×	√	×
七辰服务项目	图谱（5或18组分）	Ribo-seq测序分析	RNC-seq测序分析	无图谱-Disome-seq测序分析
	图谱+RNA（5或18组分）
	图谱+qPCR（5或18组分）
	图谱+WB（5或18组分）			图谱+Disome-seq测序分析
	图谱+测序（组分⑤单文库）
	图谱+测序（双文库-Light+Heavy组分）
	图谱+测序（双文库-Free+Binding组分）

结果展示





升级版Polysome profiling提供AUC值统计（P/non-P ratio），常用于表征样品整体的翻译活性

例：

样品	P总AUC	non-Polysome	Polysome	P/non-P ratio
A1	184.4	154.1	30.3	0.197
A2	190.2	159.8	30.4	0.190
A3	170.9	140.4	30.5	0.217

送样建议

Polysome profiling原始样本送样建议

送样类型	送样量	备注
细胞（细胞数）	≥ 1×10^7	无支原体污染
动物组织	≥ 300 mg	无
植物组织	≥ 500 mg	无

*具体处理、保存和运输方法请咨询技术支持。

物种范围：请咨询销售或技术支持。