EMSA
核蛋白提取、验证型EMSA、竞争型EMSA、超迁移EMSA、RNA/DNA结合蛋白
服务特色
七辰生物提供EMSA检测技术服务,帮助您检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白、特定的蛋白质。。
服务介绍
凝胶迁移或电泳迁移率检测(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)是一种检测蛋白质和DNA序列相互结合的技术,可用于定性和定量分析。目前已用于研究DNA结合蛋白和特定的DNA序列的相互作用,是转录因子研究的经典方法。
验证型EMSA
⽤于验证探针是否含有可与蛋⽩质结合的位点。将结合位点突变,以突变探针为对照,野⽣型探针出现迁移条带,⽽突变探针未出现迁移条带,则说明该探针含有可与蛋⽩质结合的位点。
竞争型EMSA
探针序列不变,不含修饰基团的探针称为冷探针。冷探针与标记探针竞争性地与蛋⽩结合,冷探针不显影出迁移条带。以冷探针为对照,标记探针出现迁移条带,⽽冷探针迁移条带减弱或消失,则排除了假阳性⼲扰,增加实验结果准确性。
超迁移EMSA
使⽤⽬标蛋⽩的特异性抗体,蛋⽩-探针复合物被抗体识别并结合,该三聚复合物在凝胶电泳中,迁移速率再次增⼤,出现在蛋⽩-探针复合物的上⽅的超迁移条带,验证了探针与⽬的蛋⽩的特异性结合。
服务优势
直接测定蛋白质与核酸的相互作用,提供定性和定量信息。
可用于研究多种类型的相互作用,如特异性结合、非特异性结合、序列特异性等。
技术简单,实验操作相对容易。
可以使用不同的标记方法和检测技术进行适应不同实验需求。
服务流程
酵母单杂交文库筛选:
客户提供
1、需提取核蛋白的细胞>10^7,动物组织不少于400 mg,植物组织不少于2 g,建议客户在金开瑞表达重组蛋白;
2、探针序列;
3、如使用结合蛋白特异性抗体,抗体50 μL以上,浓度大于0.5 mg/mL。
服务说明
特别说明:
▶ EMSA亦可⽤于研究RNA结合蛋⽩和其相关RNA序列的相互作⽤
▶ 如需要做超迁移,需提供IP级别的抗体
▶ EMSA与酵⺟单杂交,可共同验证同⼀个问题
| 服务名称 | 服务内容 | 交付内容及标准 | 服务周期(工作日) |
|---|---|---|---|
| DNA探针标记 RNA探针标记 |
探针标记及合成 (≤59bp) | 探针退火最少1次 (1组探针退火1次) | 7-10 |
| 探针标记及合成 (60bp-300bp) | 蛋白孵育最少1次 | 12-16 | |
| 探针标记及合成 (<60bp) | 探针标记 | 7-10 | |
| EMSA | EMSA | 10个泳道(包含阴性和阳性对照) | 10 |