免疫沉淀-质谱分析技术服务（IP-MS）
产品描述
服务简介
免疫沉淀-质谱分析技术（IP-MS）是一种基于抗体和抗原特异性结合的原理研究蛋白间互作的技术。通过能与目的蛋白结合的磁珠孵化，将能与目的蛋白结合的蛋白与其他蛋白组分分离，再通过与质谱联用，对这些分离出来的蛋白组分进行定性鉴定。
技术原理
基于特异性抗体或其他亲和试剂与靶标蛋白的亲和作用，加入能够与抗体结合的protein-A/G（预先结合固化在琼脂糖球或磁珠上），形成"结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-protein-A/G小珠"复合物，通过免疫沉淀将靶标蛋白与靶标蛋白的相互作用蛋白从复杂的样本中提取出来，进而进行质谱检测以鉴定靶标蛋白的相互作用蛋白。
技术优势
· 不仅可以用于验证已知的相互作用的蛋白，还可以用于寻找能与目的蛋白相互作用的未知的蛋白质分子
· 可以检测更接近生理状态下的相互作用蛋白
· 可提供多种蛋白互作方法进行进一步验证
实验流程
材料样品处理与保存
| 类型 | 送样标准 | 运输条件 |
|---|---|---|
| 需要基因合成的序列 | 无 | 无 |
| 构建好的质粒 中间载体质粒 |
浓度>100ng/ul，体积>20ul；提供载体序列和抗性，无污染。 | 冰袋 |
| 含构建好质粒的菌液 含中间载体质粒的菌液 |
体积>500ul；提供载体序列和抗性，无污染。 | 干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg） |
| 平板菌 | 每无污染 | 冰袋 |
| 文库质粒 | 浓度>200ng/ul，至少需要50ug，若不足50ug,公司提供质粒扩繁（收费），无污染。 | 冰袋 |
| 总蛋白样品 | 体积>500ul。 | 干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg） |
| 抗体 | IP级别抗体>30uL | 干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg） |
注：客户提供样品需要标明标签，如果提供的蛋白没有标签需要提供纯化后的蛋白及对应检测抗体。
服务内容
| 服务流程 | 工作日 | 交付材料 |
|---|---|---|
| 客户下单 | 10个 | 1、原始数据、结果图片 2、标准实验报告（含实验流程） 3、含有目的基因的质粒及测序报告 |
| 实验材料确认 | ||
| 基因合成/载体构建 | ||
| 农杆菌转化 | 7个 | |
| 阳性克隆鉴定 | ||
| 烟草瞬时表达 | ||
| 提取总蛋白 | 5个 | |
| 磁珠孵育 | ||
| 蛋白纯化 | ||
| WB鉴定 | ||
| LC-MS质谱分析 | 15个 | |
| 合计 | 15个 |
常见问题及解答
Q：IP-MS筛选出的互作蛋白，如何进行验证？
可以适用Co-IP实验进行验证，同样在体内验证互作，，也可选择双杂一对一、Pull-down等实验进行体外验证。通过数字化蛋白互作位点分析也可以得到两个互作蛋白的具体相互作用位点。
Q：IP-MS对抗体有何要求
需提供IP级别的抗体。
Q：IP-MS相比于其他的互作检测实验有何优势
不仅可以用于验证已知的相互作用的蛋白，还可以用于寻找能与目的蛋白相互作用的未知的蛋白质分子。同时由于实验为体内实验，可以找到最接近生理状态下的蛋白互作。
参考文献
1. Mazloom AR, Dannenfelser R, Clark NR, Grigoryan AV, Linder KM, Cardozo TJ, Bond JC, Boran AD, Iyengar R, Malovannaya A, Lanz RB, Ma'ayan A. Recovering protein-protein and domain-domain interactions from aggregation of IP-MS proteomics of coregulator complexes. PLoS Comput Biol. 2011 Dec;7(12):e1002319. doi: 10.1371/journal.pcbi.1002319. Epub 2011 Dec 29. PMID: 22219718; PMCID: PMC3248428.
2. Nhieu J, Wei CW, Ludwig M, Drake JM, Wei LN. CRABP1-complexes in exosome secretion. Cell Commun Signal. 2024 Jul 29;22(1):381. doi: 10.1186/s12964-024-01749-w. PMID: 39075476; PMCID: PMC11285139.