酵母核系统双杂交文库筛选及验证
产品描述
酵母双杂是一种利用酵母表达系统分析蛋白质相互作用的技术，它具有高度敏感性和广泛应用性。
技术背景
酵母双杂交系统是一种鉴定活细胞内蛋白质相互作用的研究方法，其原理是：Gal4 转录因子由 DNA 结合域（binding domain，BD）和转录激活域（active domain，AD）组成，二者可以分开独立表达为有功能的蛋白。当二者在物理空间上靠近时可以表现出完整的转录因子活性，基于此，把目的蛋白分别与 BD、AD 融合表达，当目的蛋白发生互作时，使得 BD、AD 在物理空间可以靠近，这时就能够表现出完整的转录因子功能，从而激活下游基因的表达。
技术优势
1、进行文库鉴定，选择高质量文库进行筛库，确保筛库结果可靠。
2、质粒转化酵母后 PCR鉴定，确保质粒成功转化酵母。
3、诱饵设置梯度浓度筛选，确保合适的筛选条件。
4、涂板 20 个，提供阳性克隆、诱饵质粒交付。
5、提供 NGS 测序，检测全部阳性克隆。
6、根据物种数据库信息，进行生信分析，挑选基因。
7、可提供完善的下游验证实验。
材料样品处理与保存
1、酵母文库筛选（双/单杂）技术服务
| 类型 | 送样标准 | 运输条件 | |
|---|---|---|---|
| 诱饵 | |||
| 诱饵基因序列 | 无 | 无 | |
| 构建好的诱饵质粒 | 质粒浓度≥100ng/ul，质粒体积≥30ul；有完整的测序文件； | 冰袋 | |
| 含构建好诱饵质粒的菌液 | 每管体积≥500ul；有鉴定测序文件； | 干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg） | |
| 文库 | |||
| 构建好的文库质粒 | 质粒浓度≥200ng/ul，质粒总量≥50ug；有鉴定测序文件； | 冰袋 | |
| 质文库质粒菌液 | 每管体积≥1mL，提供至少2管；有鉴定测序文件； | 干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg） | |
2、酵母一对一验证技术服务
| 类型 | 送样标准 | 运输条件 |
|---|---|---|
| 诱饵/猎物基因序列 | 无 | 无 |
| 构建好的诱饵/猎物质粒 | 质粒浓度≥100ng/ul，质粒体积≥30ul；有完整的测序文件； | 冰袋 |
| 含构建好诱饵/猎物质粒的菌液 | 每管体积≥500ul；有鉴定测序文件； | 干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg） |
服务内容
| 酵母核文库双杂交筛选 | ||
|---|---|---|
| 详细实验步骤 | 周期（工作日） | 交付材料 |
| 1、基因合成（密码子优化）/载体构建 | 10 个 | 1、阳性克隆测序结果（根据测序结果而定） 2、阳性克隆序列不少于15条 3、Word文档电子版项目报告（含实验数据） 4、诱饵质粒 5、 GO+KEGG分析结果 |
| 2、诱饵质粒的自激活检测 | 7 个 | |
| 3、诱饵质粒与文库质粒共转 4、酵母筛选的条件优化 5、筛选结果测序 |
10 个 | |
| 6、筛选结果进行阳性克隆复筛 7、数据整理和分析 |
5 个 | |
| 8、NGS测序 9、数据整理分析 10、GO+KEGG分析 |
8 个 | |
| 酵母核系统双杂交一对一互作验证 | ||
|---|---|---|
| 详细实验步骤 | 周期（工作日） | 交付材料 |
| 1、基因合成 基因合成（密码子优化）/载体构建 蛋白A载体构建至pGADT7 蛋白B载体构建至pGBKT7 |
10 个 | 1、构建的重组质粒 2、电子版文库实验报告1份 |
| 2、转化 重组质粒转化酵母细胞并进行自激活检验 |
7 个 | |
| 3、互作验证 设置阳性对照、阴性对照组，互作验证 |
10 个 | |