双荧光素酶报告基因检测实验（Dual-LUC）
荧光素酶（Luciferase）是生物体内催化荧光素或脂肪醛氧化发光的一类酶的总称，来自于自然界能够发光的生物。目前，以北美萤火虫（Photinus pyralis）来源的荧光素酶基因应用的最为广泛。利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因的上/下游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，经适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。
背景说明
荧光素酶（Luciferase）是生物体内催化荧光素或脂肪醛氧化发光的一类酶的总称，来自于自然界能够发光的生物。目前，以北美萤火虫（Photinus pyralis）来源的荧光素酶基因应用的最为广泛。利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因的上/下游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，经适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。目前，伯远生物双荧光素酶报告基因实验可在烟草叶片，水稻原生质体、烟草原生质体、拟南芥原生质体、杨树原生质体、玉米原生质体、苜蓿原生质体中验证蛋白质之间的互作，上述物种的近源物种均可以进行该实验，稳转材料不限物种。
服务流程
客户在线下单—订单/实验材料确认—重组质粒制备—材料选择—转化/染—裂解细胞—荧光检测—数据分析
图 双荧光素酶报告基因检测实验流程。
图 双荧光素酶报告基因拍照实验流程。
服务内容及说明
适用场景
1、验证microRNA同mRNA靶向互作：将待测mRNA的3'UTR序列插入报告基因载体，再共转入该microRNA，如果荧光素酶活性下降，则提示为其靶序列。
2、验证microRNA同lncRNA靶向互作：将候选的lncRNA序列插入报告基因载体中F-Luc 3'UTR区域，检测萤光素活性。
3、启动子结构分析：将启动子区域序列（通常2k左右）进行分段截短，或对特定位点进行突变，再分别构建入荧光素酶报告载体，检测其启动子活性。
4、启动子SNP分析：一些基因的启动子区域存在单核苷酸多态性，可运用萤光素酶报告系统分析其相对活性。
5、验证特定转录因子同其调控序列的作用：将该序列（通常为启动子区域）插入报告基因载体，同时在实验细胞中共转其转录因子，可分析转录因子是否提高萤光素酶活性。
6、转录因子转录调控活性；
7、验证启动子活性：将待测启动子构建至荧光素酶基因的上游，检测启动子的活性。
我司优势
1、常备水稻、烟草、拟南芥等物种的原生质体以及烟草叶片，可快速获得实验结果；
2、可增设预实验检测启动子活性；
3、增加了阳性对照以确保实验流程的可靠性；
4、体内实验，更加真实反馈植物体内的互作情况。
技术特点
双荧光素酶报告基因检测实验的优点
1、灵敏度高，比Western blot灵敏度高1000倍以上；
2、植物、哺乳动物中无报告基因内源性表达；
3、荧光素酶检测不受细胞内其它物质影响；
4、实验操作简单，检测方便；
5、检测范围广，大于7个数量级。
双荧光素酶报告基因检测实验的缺点
1、由于原生质体易于破碎，实验过程中需保证动作轻柔、试剂pH条件合适；
2、生物重复的转染效率难以保持一致；
3、目前还有很多物种的原生质体制备有待解决。
实验周期
10个工作日
结题标准
阳性对照组表达正常、有明显差异且海肾值过万（或者海肾值达到104以上范围）
交付结果
1、重组载体的全序列信息、注释信息、酶切图谱、测序结果；
2、重组载体：一份质粒、一份大肠杆菌菌液（25%甘油菌）；
3、测值实验：3组生物重复数据，加阳性对照组；拍照实验：3组实验组原始图片，加1组阳性对照组。
样本接收标准
1、质粒：体积≥20μl、，浓度≥200ng/μL，纯度OD260/280=1.6-2.0。质粒样本需要提供测序结果；提供空载对照质粒；提供的质粒体积、浓度、纯度均需满足要求，且要求无杂质。冰袋邮寄。
2、大肠杆菌甘油菌：体积≥500μL，OD600≥2.0。大肠杆菌甘油菌要求提供测序结果；提供空载对照菌液；标明菌液抗性；三个月内活性较好的菌。冰袋邮寄。
3、种子：双子叶：≥30-50粒，单子叶：≥150-200粒。种子需提供颗粒饱满、无病害近一年内采集的种子；发芽率>