酵母双杂交

核蛋白酵母双杂交、膜蛋白酵母双杂交

服务特色

七辰生物可提供酵母杂交文库构建、核酵母双杂交筛选、膜酵母双杂交筛选、酵母单/双杂交验证服务。

服务介绍

酵母双杂交及系统是一种鉴定和检测蛋白质相互作用的研究方法，因其具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点，现已被应用于多个研究领域。

核蛋白酵母双杂交：

核蛋白酵母双杂交技术最初由Fields等人在研究酵母转录因子GAL4性质时建立，后续经过不断改进已发展成为一种成熟的蛋白-蛋白互作研究工具，具有简便、灵敏、可反映蛋白在活细胞内互作真实情况的特点，被广泛应用于互作蛋白的筛选、蛋白相互作用的鉴定/验证、蛋白互作机理的探究、蛋白连锁图谱绘制等工作。

膜蛋白酵母双杂交：

DUALmembrane技术在传统的酵母双杂交系统的基础上，巧妙地利用分离的泛素系统(split-ubiquitin) 进行蛋白质相互作用的筛选；泛素作为降解信号分子，人为分成两部分：N端 (Nub)，C端 (Cub)，互补重构的完整泛素分子可被泛素专一性蛋白酶(UBPs)识别，从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。

服务优势

一站式辅助检测手段方便快捷，得到可靠的实验结论；

多年文库构建经验，4种优化的Total RNA提取技术方案可以有效保证Total RNA的纯度和完整性，保证样本的多样性。

直接检测蛋白质之间的相互作用，而不依赖于其他分子或细胞的参与；

可同时筛选和鉴定多个蛋白质间的相互作用，实现高通量的筛选和分析；

采用多个筛选步骤，如报告基因的验证和酵母菌株的双重选择，可以减少非特异性相互作用的假阳性结果；

可通过报告基因的表达水平定量评估蛋白质相互作用的强度，进一步了解相互作用的动力学和功能。

服务说明

服务流程

酵⺟杂交⽂库构建：

总RNA提取

mRNA分离及纯化

双链cDNA合成及纯化

自双链cDNA与载体融合

⼤肠⽂库菌液

⽂库质粒

酵母单杂交文库筛选：

酵母杂交筛选

诱饵重组质粒构建

诱饵⾃激活及毒性验证

酵⺟细胞共转筛选

阳性结果点钟

阳性菌提质粒及PCR鉴定

送检

测序结果分析

酵母杂交验证：

诱饵，猎物重组质粒构建

诱饵⾃激活及毒性验证

酵⺟细胞共转验证

稀释点钟验证

服务项目	应用	互补实验
酵⺟杂交⽂库构建	酵⺟杂交筛选	/
核酵⺟双杂交筛选	获得与已知蛋⽩互作的未知蛋⽩	COIP，GST pulldown
膜酵⺟双杂交筛选	研究膜蛋⽩之间的互作	COIP，GST pulldown
酵⺟单/双杂交验证	已知蛋⽩与蛋⽩/启动⼦之间的互作	EMSA，双荧光素酶，COIP，GST pulldown

服务项目	客户提供	最终交付
文库构建	组织/细胞	滴度在1×10cfu/mL以上的酵母文库菌液；文库PCR鉴定结果图片(阳性率在90%左右)
文库筛选	蛋白序列/基因序列/质粒	筛选过程中的全部原始图片；筛选获得所有相互作用的猎物蛋白的测序结果